粗提和純化方法
腹水型單抗的純化
在單克隆抗體的純化，有必要進行預處理以腹水進一步提取特殊殘基和小顆粒細胞和脂肪滴。常用的措施如下：
1、過濾離心
腹水是過濾微孔過濾去除較大的凝塊和脂肪滴。細胞碎片和小顆粒物質與10000g 15分鐘高速離心(4℃)刪除。
2、硅膠吸附
腹水(或凍存的腹水)稀奇古怪，2000r/min 15分鐘，去除細胞因子(或凍存過程中形成的固體物質)；表面清涼的腹水，相當于pH7.2巴比妥緩沖液(VBS;0.004mol/L巴比妥,0.15mol/L NaCl,0.8mmol/L Mg2+,0.3mmol/L Ca2+)稀釋；然后每稀釋10mL 150硅微粉、腹水混合，30分鐘，在室溫下懸浮液培養(yǎng)反復震蕩；2000g離心20分鐘。通過去除脂肪的方法，澄清腹水。
3、混合梗直
上面兩種方法結合起來，第一個高速離心的上清和腹水，硅膠吸附處理。
兩和單克隆抗體
1、硫酸銨的方法
對(1)強硫酸銨溶液的制備
500g硫酸銨加入500mL蒸餾水，加熱溶解，室溫調節(jié)，讓它留在沉淀結晶。在服用規(guī)定量，用2mol/L氫氧化鈉溶液的pH為7.8。
(2)鹽析
良好的學習10ml腹水入小燒杯中，在攪拌下，加入飽和硫酸銨溶液5.0ml；繼續(xù)緩慢攪拌30分鐘；10000r/min離心15分鐘；棄去上清液，1 / 3飽和度的硫酸銨懸浮泥沙，30分鐘的攪拌工具，用重復步驟方法離心前；1-2溶液；在1.5ml PBS(0.01mol/L PH7.2)或Tris-HCl緩沖沉積物。
(3)淡化
常用的柱層析或透析。采用柱層析鹽析的例子通過Sephadex G-50柱，用PBS或Tris-HCl慢
解決方案被視為平衡液和洗脫，流速每分鐘1ml。第一個蛋白峰脫鹽溶液。透析法透析袋2% nahco3,1mmol／L EDTA溶液中煮沸10分鐘，沖洗后用蒸餾水透析袋的表面，然后用蒸餾水透析10分鐘，冷卻至室溫可操縱(并可于0.2mol/L EDTA溶液中,4℃保存?zhèn)溆?。鹽析樣品裝入透析袋，50-100體積PBS或Tris-HCl緩沖液透析(4℃)12-24小時，其間5透析液的更換，以萘(碘化汞11.5g,碘化鉀8g,加蒸餾水50ml,待溶解后,再加20% NaOH 50ml)檢測試劑，直到黃色物質透析液變得那么遠。
在(4)蛋白含量的測定
(Pr)(mg/ml)=(1.45×OD280-0.74×OD260)×稀釋倍數(shù)；或(Pr)= OD280×稀釋倍數(shù)/ 1.3
(5)冷凍貯藏
2、悲傷的硫酸銨沉淀法
該方法簡單適用的IgG1和IgG2b的凈化，但IgG3和IgA和凈化結果差異的比差。關鍵步驟如下：1樣品預處理2對腹水pH5.0醋酸緩沖溶液、1mol/L HCl調節(jié)pH值至4.8；每毫升稀釋的腹水加11ul辛酸比，攪拌滴加在加4℃30分鐘后酸在室溫下靜置2小時，取出15000g離心30分鐘，棄去上清液沉淀；尼龍篩(125um)，加入1／10體積的PBS溶液、1mol/L NaOH調pH至7.2；加入飽和硫酸銨飽和度為45%下4度，30分鐘，站了1小時；30分鐘，10000g離心上清液；沉淀溶于PBS(含 137mmol/L NaCl,2.6mol/L KCl,0.2mmol/L EDTA)PBS一個適當?shù)牧�，量的透析�?0-100倍，4度過夜，而2Ch改變水的3倍以上；30分鐘取出10000g離心，除去不溶物，蛋白質含量的測定，包裝，冷凍保存。
3、球蛋白沉淀法
該方法應用于IgG3和IgM抗體捕獲
抗體的活性完全保留標準，恢復IgG3高于90%，IgM單克隆抗體回收率為40-90 %的范圍內。它負責以下步驟：以預處理后的腹水量要求，加入了NaCl和氯化鈣，鈉和25mmol/L濃度差異，與纖維蛋白的呈現(xiàn)；通過濾紙，去離子水體積的濾液透析100次，4℃8-15小時(若是IgG3單抗,也可室溫2小時)，這換水去除22000g后1-2次；30分鐘，離心，上清液；沉淀溶解在pH8.0 1mol/L NaCl，0.1mol/L Tris-HCl溶液，重復上述透析和離心；泥沙優(yōu)球蛋白溶解濃度5-10mg／ml，包裝和冷凍保存。有單克隆抗體的純化方法很多，有三種方法：DEAE離子交換層析和凝膠過濾。
